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平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基的應(yīng)用介紹

更新時間:2023-01-05      點擊次數(shù):1742
  平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基是一個基于碳酸氫鹽的緩沖體系強大的功能,可以在孵育的5%的CO?的氣體環(huán)境下維持一個圍繞pH7.2的酸堿緩沖體系。本體系是一個無菌的液體混合系統(tǒng),其中包含必須和非必須氨基酸效果、維生素、激素創新科技、生長因子豐富內涵、微量元素和一些其他的有機和無機化合物以及胎牛血清(10%)。
  平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基SMCM可用于平滑肌細(xì)胞增殖實驗:
  以25cm2(50ml)一次性培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞特征更加明顯,細(xì)胞在經(jīng)過消化傳代后明顯較原代胖大增多,細(xì)胞可自行沿一定方向生長,表現(xiàn)為峰谷樣圖案。平滑肌細(xì)胞隨著傳代次數(shù)增多估算,體積會逐漸增大,突觸明顯并逐漸喪失梭形結(jié)構(gòu)達到,當(dāng)細(xì)胞生長密集時深入各系統,擁擠的細(xì)胞逐層環(huán)繞,中心可隆起呈結(jié)節(jié)狀的可能性。將酶消化法獲得的細(xì)胞傳代至第3代進一步推進,分別以平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基SMCM或含10%新生牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基(10%-F12)進(jìn)行培養(yǎng),及時記錄細(xì)胞生長情況。以每孔2000個細(xì)胞為標(biāo)準(zhǔn)將第3代平滑肌細(xì)胞接種于96孔板內(nèi)明確相關要求,每個樣本需重復(fù)3~4個輔助測量孔服務為一體。將96孔板靜置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi),6小時后觀察細(xì)胞貼壁特點、舒展相互配合。以每100μl培養(yǎng)基加10μlCCK-8試劑的比例配置混懸劑。清除各待測孔培養(yǎng)基后品質,每孔加入混懸劑100μl積極回應。將96孔板靜置于培養(yǎng)箱內(nèi)2h后取出,置于微孔板振蕩器上震蕩1min深化涉外,將96孔板轉(zhuǎn)至酶標(biāo)儀全會精神,在450nm波長下讀取各孔數(shù)據(jù)并記錄。測量吸光值后的孔不再重復(fù)使用又進了一步。每24h測量一次實驗孔吸光值的過程中,連續(xù)測量9天(216h)。觀察結(jié)果發展基礎。
  使用該培養(yǎng)基時應(yīng)注意將基礎(chǔ)介質(zhì)儲存在4℃延伸,將SMCGS、FBS和P/S溶液儲存在-20℃要求。避光保存。
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