分散酶II能快速有效且溫和的破壞組織細(xì)胞外基質(zhì)釋放單細(xì)胞培養(yǎng)物(原代細(xì)胞培養(yǎng)物)或收集已培養(yǎng)的細(xì)胞將其轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基質(zhì)上(傳代培養(yǎng))。
分散酶II可應(yīng)用于組織的解離推進一步,具體步驟如下:
1探索創新、用無菌的小刀或者剪刀將組織剪成合適大小的組織塊。
2帶動擴大、用無菌PBS清洗組織塊前來體驗。
3、向上述組織塊中加入Dispase II溶液( 工作濃度為0.6-24U/ml)實現了超越,并確保組織塊全部浸沒于Dispase溶液中發揮重要帶動作用。
4、37°C孵育確定性,孵育過程緩慢攪拌直至組織塊全部解離明確了方向。(若*一次使用該酶去完善,可通過細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定需要的總孵育時(shí)間。一般對(duì)于較難解離組織必然趨勢,1h即可達(dá)到分離目的設備,但更長(zhǎng)時(shí)間(如數(shù)小時(shí))的孵育也不會(huì)明顯影響細(xì)胞活性。)
5文化價值、如有需要促進善治,可將上述消化產(chǎn)物通過無菌不銹鋼網(wǎng)篩過濾,以分開單細(xì)胞與殘留的組織塊廣度和深度玫囊蛩刂?;蛘叽髩K組織沉淀后輕輕倒出上層細(xì)胞,若是需要日漸深入,換用新鮮dispase溶液以進(jìn)一步解離殘留組織奮勇向前。
6、離心沉淀細(xì)胞預期,倒掉酶溶液;
7經驗、用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀,并于常規(guī)條件下培養(yǎng)細(xì)胞顯示。
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