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分散酶II可應用于組織的解離

更新時間:2022-06-01      點擊次數:1497
分散酶II(中性蛋白酶)是一種氨基酸內肽酶共同,可水解非極性氨基酸殘基的 N 端肽鍵。該序列常見于膠原蛋白求索。分散酶II 具有溫和的蛋白水解作用自動化裝置,可用于原代細胞的分離和常規(guī)傳代建言直達。分散酶II 相對溫和統籌發展,在生理溫度和 pH 值下具有良好的解離能力日漸深入,通常可維持細胞膜完整性顯示。

分散酶II能快速有效且溫和的破壞組織細胞外基質釋放單細胞培養(yǎng)物(原代細胞培養(yǎng)物)或收集已培養(yǎng)的細胞將其轉移到新的培養(yǎng)基質上(傳代培養(yǎng))技術特點。

分散酶II可應用于組織的解離,具體步驟如下:

1共同努力、用無菌的小刀或者剪刀將組織剪成合適大小的組織塊保持競爭優勢。

2、用無菌PBS清洗組織塊發展邏輯。

3方案、向上述組織塊中加入Dispase II溶液( 工作濃度為0.6-24U/ml),并確保組織塊全部浸沒于Dispase溶液中發展機遇。

4創新延展、37°C孵育,孵育過程緩慢攪拌直至組織塊全部解離。(若*一次使用該酶哪些領域,可通過細胞計數來確定需要的總孵育時間。一般對于較難解離組織產品和服務,1h即可達到分離目的像一棵樹,但更長時間(如數小時)的孵育也不會明顯影響細胞活性。)

5迎難而上、如有需要有效保障,可將上述消化產物通過無菌不銹鋼網篩過濾,以分開單細胞與殘留的組織塊更高效∩杂胁簧?;蛘叽髩K組織沉淀后輕輕倒出上層細胞,若是需要,換用新鮮dispase溶液以進一步解離殘留組織全面協議。

6、離心沉淀細胞堅持先行,倒掉酶溶液;

7講實踐、用培養(yǎng)基重懸細胞沉淀,并于常規(guī)條件下培養(yǎng)細胞具體而言。

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